本案例基于普健自有哺乳表達系統(tǒng)—高產(chǎn)量pATX系列載體及馴化CHO系列細胞，通過密碼子優(yōu)化，基因合成方法，合成重鏈和輕鏈的可變區(qū)，再分別通過亞克隆的方式將可變區(qū)構(gòu)建至PATX系列表達載體，雙質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染XtenCHO細胞，通過SDS-PAGE驗證重組抗體表達情況，經(jīng)表達驗證后，擴大培養(yǎng)收集細胞上清并通過proteinA親和柱純化獲得重組抗體。

二、實驗方案

　　(1)以客戶提供的重鏈輕鏈序列為模板，通過密碼子優(yōu)化，選擇更適宜XtenCHO細胞系的基因序列，進而確         定表達質(zhì)粒的構(gòu)建方案。

　　(2)采用普健生物自主載體PATX進行構(gòu)建，經(jīng)測序驗證無誤后，提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒。

　　(3)轉(zhuǎn)染前，確定XtenCHO細胞狀態(tài)，待轉(zhuǎn)染完成，培養(yǎng)數(shù)天后收取上清，通過SDS-PAGE驗證重組抗體表         達情況，最后通過Protein A純化法獲得重組抗體。

三、實驗結(jié)果

　　(1)抗體純度鑒定

圖 1. 抗體質(zhì)檢圖. 考馬斯亮藍染色.

A. 還原PAGE. B. 非還原 PAGE.

　　(2)通過SEC-HPLC進一步純化，獲得單一峰的重組抗體，HPLC檢測純度在98%。

　　(3)抗體交付

　　純化抗體產(chǎn)量：5L表達體系

         注：內(nèi)毒素水平：0.45 EU/ml

相關(guān)服務(wù)

　　雜交瘤測序  抗體人源化  雙特異性抗體  噬菌體展示抗體制備